Вирусын нуклейн хүчил илрүүлэх

Ихэнх вирусын геномын дараалал нь мэдэгдэж байсан.ДНХ-ийн богино сегмент болох нуклейн хүчлийн зондууд нь нэмэлт вирусын ДНХ эсвэл РНХ сегментүүдтэй эрлийзжих зориулалттай.Полимеразын гинжин урвал (ПГУ) нь вирус илрүүлэх илүү үр дүнтэй арга юм.Өндөр хүчин чадалтай оношлогооны аргуудыг саяхан боловсруулсан.

A. Нуклейн хүчлийг эрлийзжүүлэх арга

Нуклейн хүчлийн эрлийзжүүлэлт, үүнд голчлон Southern blotting(Southern) болон Northern blotting(Northern) зэрэг нь вирусын оношлогооны салбарт хурдацтай хөгжиж буй шинэ арга юм.Гибридизацийн шинжилгээний үндэслэл нь нэмэлт вирусын ДНХ эсвэл РНХ сегментүүдтэй эрлийзжүүлэх зориулалттай ДНХ-ийн богино сегментүүдийг (“зонд” гэж нэрлэдэг) ашиглах явдал юм.Халаалт эсвэл шүлтлэг боловсруулалтаар хоёр судалтай зорилтот ДНХ эсвэл РНХ нь нэг хэлхээнд хуваагдаж, дараа нь хатуу тулгуур дээр хөдөлгөөнгүй болдог.Үүний дараа зонд нэмж, зорилтот ДНХ эсвэл РНХ-тэй эрлийзжүүлнэ.Зорилтот ДНХ эсвэл РНХ-ийг изотоп эсвэл цацраг идэвхт бус нуклид гэж тэмдэглэсэн тул авторадиограф эсвэл биотин-авидин системээр илрүүлж болно.Вирусын ихэнх геномуудыг клончилж, дараалуулсан тул тэдгээрийг вирусын өвөрмөц дарааллыг сорьцонд датчик болгон ашиглан илрүүлж болно.Одоогийн байдлаар эрлийзжүүлэх аргууд нь: цэгэн толбо, эсийг in situ эрлийзжүүлэх, ДНХ арилгах (ДНХ) (Өмнөд толбо) болон РНХ арилгах (РНХ) (Хойд толбо).

B.PCR технологи

Сүүлийн жилүүдэд мэдрэмтгий эсвэл тариалах боломжгүй вирүсийг туршихын тулд ПГУ-д суурилсан in vitro нуклейн хүчлийг олшруулах хэд хэдэн аргыг боловсруулсан.ПГУ нь in vitro полимеразын урвалаар тодорхой ДНХ-ийн дарааллыг нэгтгэх арга юм.ПГУ-ын үйл явц нь гурван үе шаттай дулааны мөчлөгийг агуулдаг: денатураци, анивчих, сунгах Өндөр температурт (93℃~95℃) хоёр хэлхээтэй ДНХ нь хоёр нэг ДНХ-ийн хэлхээнд хуваагддаг;дараа нь бага температурт (37℃~60℃) нийлэгжсэн хоёр нуклеотидын праймер нэмэлт ДНХ-ийн сегментүүдэд наалддаг;Харин Taq ферментийн тохиромжтой температурт (72℃) шинэ ДНХ-ийн гинжний нийлэгжилт нь нэмэлт ДНХ-ийг загвар болгон, дан нуклеотидыг материал болгон ашиглан праймер 3-аас эхэлдэг.Тиймээс мөчлөг бүрийн дараа нэг ДНХ-ийн гинжийг хоёр гинж болгон өсгөж болно.Энэ процессыг давтан хийснээр нэг мөчлөгт нийлэгжсэн ДНХ-ийн гинж бүрийг дараагийн мөчлөгт загвар болгон ашиглаж болох ба мөчлөг бүрт ДНХ-ийн гинжин хэлхээний тоо хоёр дахин нэмэгддэг бөгөөд энэ нь ПГУ-ын үйлдвэрлэлийг 2 n лог хурдаар нэмэгдүүлдэг гэсэн үг юм.25-30 мөчлөгийн дараа ПГУ-ын нийлэгжилтийг электрофорезын аргаар тодорхойлж, ДНХ-ийн тодорхой бүтээгдэхүүнийг хэт ягаан туяаны гэрэлд (254 нм) ажиглаж болно.Өвөрмөц чанар, мэдрэмж, тав тухтай байдлын хувьд ПГУ-ыг HCV, ХДХВ, CMV, HPV зэрэг олон вирусын халдварын эмнэлзүйн оношлогоонд ашигласан.ПГУ нь маш мэдрэмтгий тул вирусын ДНХ-г fg түвшинд илрүүлж чаддаг тул худал эерэг гарахаас зайлсхийхийн тулд үйл ажиллагааг маш болгоомжтой хийх хэрэгтэй.Нэмж дурдахад нуклейн хүчлийн шинжилгээний эерэг үр дүн нь дээжинд амьд халдварт вирус байгаа гэсэн үг биш юм.

ПГУ-ын техникийг өргөнөөр ашигласнаар ПГУ-ын техник дээр суурилсан туршилтын янз бүрийн зорилгоор шинэ техник, аргуудыг боловсруулж байна.Жишээлбэл, бодит цагийн тоон ПГУ нь вирусын ачааллыг илрүүлэх боломжтой;in situ ПГУ-ыг эд, эсэд вирусын халдварыг тодорхойлоход ашигладаг;Үүрдсэн ПГУ нь ПГУ-ын өвөрмөц байдлыг нэмэгдүүлэх боломжтой.Тэдгээрийн дотроос бодит цагийн тоон ПГУ-ыг илүү хурдацтай хөгжүүлсэн.TaqMan гидролизийн датчик, гибридизацийн датчик, молекулын дохионы датчик зэрэг олон шинэ техникийг бодит цагийн тоон ПГУ-ын техник болгон нэгтгэсэн бөгөөд энэ нь эмнэлзүйн судалгаанд өргөн хэрэглэгддэг.Энэ аргыг өвчтөний биеийн шингэн дэх вирусын ачааллыг нарийн тодорхойлохоос гадна эмэнд тэсвэртэй мутантыг илрүүлэхэд ашиглаж болно.Тиймээс бодит цагийн тоон ПГУ-ыг эмчилгээний үр нөлөөг үнэлэх, эмийн хүлцлийн тандалтад голчлон ашигладаг.

C. Вирусын нуклейн хүчлийг өндөр хурдтай илрүүлэх

Шинээр гарч ирж буй халдварт өвчнийг хурдан оношлох хэрэгцээг хангахын тулд ДНХ чип (ДНХ) гэх мэт өндөр хүчин чадалтай илрүүлэх янз бүрийн аргуудыг бий болгосон.ДНХ чипийн хувьд тусгай зондуудыг нийлэгжүүлж, маш өндөр нягтралтай жижиг цахиурын чипүүдэд хавсаргаж, дээжтэй эрлийзжүүлж болох ДНХ датчикийн бичил массив (ДНХ) үүсгэдэг.Гибридизацийн дохиог конфокаль микроскоп эсвэл лазер сканнераар дүрсэлж, компьютерт боловсруулж, янз бүрийн генийн талаархи асар том мэдээллийн багцыг олж авах боломжтой.Хоёр төрлийн ДНХ чип байдаг."Синтезийн чип" нь дараах байдалтай байна: тодорхой олигонуклеотидууд нь чипс дээр шууд нийлэгждэг.Өөр нэг зүйл бол ДНХ пулын чип юм.Клончлогдсон генүүд эсвэл ПГУ-ын бүтээгдэхүүнийг слайд дээр эмх цэгцтэй хэвлэдэг.ДНХ чип технологийн давуу тал нь асар их хэмжээний ДНХ-ийн дарааллыг нэгэн зэрэг илрүүлэх явдал юм.Эмгэг төрүүлэгч бичил схемийн хамгийн сүүлийн хувилбар нь хүний ​​1700 гаруй вирусыг нэгэн зэрэг таних боломжтой.ДНХ чип технологи нь уламжлалт нуклейн хүчлийн эрлийзжүүлэлтийн аргуудын асуудлыг шийдэж, вирусын оношлогоо, эпидемиологийн судалгаанд маш өргөн хэрэглэгддэг.